Determinarea grupei sanguine este unul dintre cele mai vechi și mai importante teste de rutină din medicină. Karl Landsteiner a identificat grupele ABO în 1901, după ce a observat că sângele unor persoane se aglutina atunci când era amestecat cu cel al altora, iar factorul Rh a fost descris patru decenii mai târziu. Împreună, cele două sisteme decid dacă o transfuzie salvează o viață sau distruge hematiile primitorului în câteva minute și sunt verificate înainte de fiecare transfuzie, în fiecare sarcină și în activitatea medico-legală și de stabilire a paternității.
Testul se bazează pe o singură idee moleculară. Suprafața unei globule roșii poartă markeri ereditari de zahăr și proteine numiți antigene: antigenul A, antigenul B, ambele sau niciunul și, separat, antigenul Rh (D). Un ser care conține anticorpi împotriva unuia dintre aceste markere — un aglutinină — are două sau mai multe situsuri de legare, astfel încât, atunci când întâlnește celule care poartă antigenul țintă, le leagă împreună în aglomerări vizibile. Aceasta este aglutinarea: picătura își pierde aspectul neted și uniform roșu și devine granuloasă, cu pete mai întunecate într-un lichid limpid. Când antigenul lipsește, anticorpii nu au de ce să se lege, iar picătura rămâne uniformă. Prin urmare, testul este citit ca un simplu da sau nu, de trei ori la rând.
În acest laborator veți determina grupa sanguină pentru opt probe de sânge necunoscute. Fiecare probă este plasată în trei godeuri separate și testată pe rând cu ser anti-A, anti-B și anti-Rh, amestecând fiecare godeu cu o baghetă de sticlă care este clătită și uscată între godeuri, astfel încât să nu fie transferat ser de la un test la altul. Din tiparul de trei răspunsuri de tip da sau nu, veți deduce grupa ABO și statusul Rh al fiecărei probe, iar apoi veți stabili care dintre ele poate dona în siguranță către celelalte.
Obiective educaționale
Familiarizarea cu mediul de laborator
- Localizați plăcile cu godeuri și schema lor de etichetare, cele trei pipete pentru ser, bagheta de sticlă, apa distilată și hârtia absorbantă și înțelegeți de ce fiecare probă necesită trei godeuri în loc de unul.
Manipularea în siguranță a probelor biologice
- Tratați fiecare probă de sânge ca fiind potențial infecțioasă: purtați mănuși și ochelari de protecție, evitați contactul cu pielea și eliminați materialul contaminat ca deșeu biologic periculos, mai degraba decât ca gunoi obișnuit.
Evitarea contaminării încrucișate
- Clătiți și uscați bagheta de sticlă între fiecare operațiune de amestecare și explicați cum ar arăta un rezultat fals pozitiv dacă serul ar fi transportat dintr-o godeu anti-A într-o godeu anti-B.
- Adăugați ser în sânge fără ca vârful pipetei să atingă godeul, astfel încât serul stoc să nu fie contaminat înapoi.
Citirea unei reacții de aglutinare
- Diferențiază o picătură cu adevărat aglutinată — granulară, aglomerată, cu agregate vizibile pe un fundal mai clar — de o picătură nereacționată care rămâne netedă și colorată uniform.
- Înregistrați fiecare dintre cele două patru observații ca o valoare pozitivă sau negativă înainte de a încerca orice interpretare.
Determinarea grupului sanguin ABO și a statutului Rh
- Convertește un șir de trei rezultate într-un grup sanguin și precizează ce antigeni sunt prezenți pe hematii și ce anticorpi sunt prezenți în plasmă.
Raționamentul privind compatibilitatea transfuzională
- Folosiți rezultatele testului de tipaj pentru a prezice care perechi donator–primitor sunt sigure și explicați în termeni de antigen–anticorp de ce grupa O Rh− este donatorul universal de hematii, iar grupa AB Rh+ este primitorul universal.
Protocol
- Pune 5 picături de probă de sânge 1 în fiecare dintre cele 3 godeuri identificate astfel:
- bine 1 (anti_A)
- bine 1 (anti_B)
- bine 1 (anti_Rh)
- Puneți 2 picături de aglutinină anti-A în godeul 1 (1/anti-A).
- Amesteca imediat cu o baghetă de sticlă curată.
- Puneți 2 picături de aglutinină anti-B în godeul identificat 1 (1/anti-B).
- Amesteca imediat cu o baghetă de sticlă curată.
- Puneți 2 picături de aglutinină anti-Rh în godeul 1, bine identificat (1/anti-Rh).
- Amesteca imediat cu o baghetă de sticlă curată.
- Clătiți bagheta de sticlă cu apă distilată.
- Usucați tija de sticlă cu hârtie absorbantă.
- Repetați pașii pentru probele de sânge 2, 3, 4, 5, 6, 7 și 8.
Rezultate anticipate
| Probă de sânge | anti-A | anti-B | anti-Rh | Grupă sanguină |
|---|---|---|---|---|
| 1 | Aglutinare | — | Aglutinare | A Rh+ (A+) |
| 2 | Aglutinare | Aglutinare | — | AB Rh− (AB−) |
| 3 | — | — | — | 0 Rh− (0−) |
| 4 | Aglutinare | — | — | A Rh negativ (A−) |
| 5 | — | — | Aglutinare | O Rh+ (O+) |
| 6 | Aglutinare | Aglutinare | Aglutinare | AB Rh+ (AB+) |
| 7 | — | Aglutinare | — | B Rh− (B−) |
| 8 | — | Aglutinare | Aglutinare | B Rh+ (B+) |
Cum se citește modelul
Fiecare godeu răspunde la o singură întrebare: se află acest antigen pe celule? Aglutinarea cu anti-A înseamnă că antigenul A este prezent, aglutinarea cu anti-B înseamnă că antigenul B este prezent, iar grupul ABO decurge în mod direct — doar A dă grupul A, doar B dă grupul B, ambele dau grupul AB, niciunul nu dă grupul O. Al treilea godeu se citește independent de primele două: aglutinarea cu anti-Rh înseamnă că celulele conțin antigenul D și proba este Rh pozitiv, lipsa aglutinării înseamnă Rh negativ. Proba 3 este singura care dă trei rezultate negative și este singura O Rh−; proba 6 este singura care dă trei rezultate pozitive și este singura AB Rh+.
De ce se formează cocoloașele
Aglutininele anti-A și anti-B sunt anticorpi de tip IgM, molecule pentamerice mari cu zece situsuri de legare a antigenului. Prin urmare, o singură moleculă de IgM poate se lege de mai multe hematii în același timp, iar câteva mii dintre acestea transformă o suspensie omogenă într-o rețea de celule unite prin punți în câteva secunde. Acesta este motivul pentru care reacția ABO este citită la temperatura camerei cu ochiul liber și nu necesită incubație. Anti-D este în mod tipic de tip IgG, având doar două situsuri de legare, astfel încât într-un laborator clinic testul Rh necesită adesea o reacție mai lungă sau un reactiv adăugat; aici el este citit în același mod ca celelalte.
Anticorpii ABO sunt, de asemenea, neobișnuiți prin faptul că sunt prezenți fără o expunere anterioară la sânge uman. O persoană din grupa A poartă anti-B în plasmă încă din copilărie, generați aproape sigur împotriva structurilor de zahăr foarte similare de pe bacteriile intestinale. Prin urmare, fiecare individ are anticorpi exact împotriva acelor antigene ABO care lipsesc propriilor celule – regula care face ca neconcordanța ABO să fie atât de imediat periculoasă.
Consecințe pentru transfuzie
| Grup | Antigenele de pe hematii | Anticorpii din plasmă | Poate primi hematii de la |
|---|---|---|---|
| A | A | anti-B | A, O |
| B | B | anti-A | B, O |
| AB | A și B | niciunul | A, B, AB, O |
| O | niciunul | anti-A și anti-B | O |
Rh-ul adaugă o a doua constrângere asimetrică. Un primitor Rh− care primește celule Rh+ nu reacționează la prima expunere, deoarece anti-D nu este prezent în mod natural, dar sistemul imunitar este sensibilizat și o transfuzie ulterioară cu Rh+ poate provoca hemoliză severă. Același mecanism stă la baza bolii hemolitice a nou-nascutului: o mamă Rh− care poartă un făt Rh+ poate produce anti-D care traversează placenta într-o sarcină ulterioară, motiv pentru care se administrează imunoglobulină anti-D profilactică. Dintre cele opt probe de aici, 2, 3, 4 și 7 sunt Rh negative și ar avea nevoie de sânge Rh−.
Rezumatul temei pe intervale de note
Clasele a IX-a și a X-a
- Focus — observație atentă și vocabularul testului: antigen, anticorpus, aglutinină, aglutinare, grupă ABO, factor Rh, donator, primitor.
- Activități — tastați toate cele opt probe, înregistrați fiecare dintre cele douăzeci și patru de godeuri ca fiind pozitiv sau negativ într-o grilă de rezultate, apoi denumiți grupul fiecărei probe pe baza modelului său. Răspundeți la întrebările ghidate: care probă nu a dat nicio reacție și ce vă spune acest lucru despre hematiile ei? De ce trebuie clătit bastonul de sticlă între godeuri?
Clasa a XI-a
- Focus — trecerea de la observație la imunologia subiacentă și utilizarea rezultatelor pentru a face predicții.
- Activități — pentru fiecare dintre cele opt probe, menționați antigenii de pe celule și anticorpii ABO din plasmă; construiește grila completă de compatibilitate donator-primitor pentru cele opt probe și identifică fiecare asociere sigură; explică de ce proba 3 poate dona hematii tuturor celorlalte șapte, în timp ce proba 6 nu poate dona niciuneia dintre ele; și explică de ce testul Rh trebuie citit separat de testele ABO, și nu combinat cu acestea.
Clasa a XII-a / Nivel universitar
- Focus — genetica și chimia anticorpilor.
- Activități — deduceți posibilele genotipuri ABO din spatele fiecărui fenotip observat (iAiA sau iAeu pentru grupa A și așa mai departe) și să explicați de ce AB este codominant, în timp ce O este recesiv; să justificați diferența dintre IgM și IgG în ceea ce privește valența și modul în care aceasta modifică obținerea clinică a rezultatului anti-D; să concepeți o verificare a determinării inverse care să confirme fiecare dintre cele opt rezultate și să precizați ce ar implica o discrepanță între determinarea directă și cea inversă; și să explicați mecanismul și momentul profilaxiei anti-D la o mamă Rh−, utilizând probele 2, 3, 4 și 7 ca studii de caz.
Esențiale de laborator
Instrumente
- Plăci cu godeuri (trei godeuri per probă de sânge, etichetate anti-A, anti-B și anti-Rh)
- Pipete, câte una pentru fiecare ser
- Baghetă de sticlă (pentru amestecare)
- Hârtie absorbantă
- Mănuși și protecție pentru ochi
Produse
- 8 probe de sânge de grup necunoscut (câte 5 picături din fiecare pe godeu)
- Ser aglutinant anti-A (2 picături pe test)
- Ser aglutinant anti-B (2 picături pe test)
- Ser de aglutinare anti-Rh (2 picături pe test)
- Apă distilată (pentru clătirea baghetei de sticlă)